SN/T 2635—2010 水稻瘤矮病毒的检疫鉴定方法

SN/T 2635—2010. 1范围 SN/T 2635规定了水稻瘤矮病毒检疫鉴定的程序和方法。本标准适用于水稻上水稻瘤矮病毒的检测。 2原理 水稻瘤矮病毒学名:rice gall dwarf sirus,编写。 RGDV,水稻瘤修病毒的分子生物学特性是本标准 制定的主要依据;该病毒的分类地位、寄主范围,护香症状、分布业区.传播途径、粒体形态,病毒基因组等参见附录A。 3仪器设备﹑用具及试剂 3.1仪器设备 高速冷冻离心机﹑微量天平(17/1 000 g),PCR仪、实时灾光PCR仪,电泳仪,水平电泳槽、凝胶成像分析系统,pH计,微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅,高压灭菌卧超净工作台等。 3.2用具 各种量程的可调移液器(1doo al. 200 uL 100 pL, 2o0 p、 ,10 nl2 pL),PCR反应管、无RNase 离心管(1.5 mL)、研钵等。 3.3 试剂 3.3.1TrizoL裂解液。 3.3.25×TBE缓冲液 Tris碱54.0 g硼酸27.5 g 0.5 mol/ L EDTA(pH8.0)20 ml补充蒸馏水至1 L. 3.3.36×加样缓冲液 0.25%溴酚蓝 40%(质量浓度)蔗糖水溶液。 3.3.4 三氯甲烷。 3.3.5异丙醇。 3.3.675%乙醇。 5结果判定及记录 5.1结果判定 当RT-PCR,实时荧光RT-PCR两种检测方法的检测结果均呈阳性时,则判定为检出RGDV。 当RT-PCR检测结果呈阳性,测定的序列为RGDV序列(与已报道的RGDV序列同源性达90%以上),则判定为检出RGDV。 5.2结果记录 记录好各项实验数据,包括样品来源,种类,时间实验的时间、点、方法和结果等,并要有经手人和实验人员的签字。分子生物学检测结果保留p永照片,序列)定结果保留测序报告图。 6样品的保存 经检测结果判定为阳性的样品应妥善保存在一20 C--80 ℃超低温冰箱中,并作好登记和标记工作,以备复核用。