SN/T 2565-2010 食品中志贺氏菌分群检测MPCRR-I》HPLC法

SN/T 2565-2010. 1范围 SN/T 2565规定了食品中志贺氏菌,包括福氏志贺氏菌,宋氏志贺氏菌,鲍氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌的MPCR-DHPLC分群检测方法。 SN/T 2565适用于食品中志贺氏菌,包括福氏志贺氏菌,宋氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌、痢疾志贺氏菌的MPCR-DHPIC快速分群检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件,凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T4789.5食品卫生微生物检验志贺氏菌检验 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室生物安全通用要求 GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检验 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 3.1 PCRpolymerase chain reaction聚合酶链式反应。 3.2 MPCRmultiplex PCR多重PCR。 3.3 DHPLCdenaturing high performance iqwid chromatography变性高效液相色谱。 3.4 TEAA 兰乙基铵乙酸盐。 4生物安全措施 5废弃物处理和防止污染的措施 5.1检测过程中的废弃物需经121℃高压灭菌处理至少30 min后再弃置。 5.2检测过程中防止交叉污染的措施按GB/T 27403规定执行。 6原理 MPCR,又称多重引物.PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上两对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原理.反应试剂和操作过程与一般PCR相同。DHPLC分析技术是应用离子对反相液相色谱原理对DNA片段进行分离。离子对采用三乙基胺乙酸盐缓冲溶液(TEAA),核苷酸片段分子中带负电荷的磷酸根基团与TEAA分子中带正电荷的氨基发生静电作用相互吸引,同时TEAA分子中的三个乙基与固定相C。表面的烷基发生疏水作用力而相互吸引,通过流动相中的乙腈的梯度洗脱达到将不同大小的核苷酸片段分离。