SN/T 2564-2010 水产品中致病性弧菌检测MPR6CR·》夏PLC法

SN/T 2564-2010. 1范围 SN/T 2564规定了水产品中副溶血性弧菌,霍乱弧菌﹑创伤弧菌﹑溶藻弧菌,拟态弧菌5种致病性弧菌的MICR-DHPLC检测方法。 SN/T 2564适用于水产品中副溶血性弧菌、霍乱弧菌﹑创伤弧菌,溶藻弧菌,拟态弧菌5种致病性弧菌的快速检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡.是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件,凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 4789.7食品卫生微生物检验副溶血性弧菌检验 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室生物安全通用要求 GB/T 27403实验室质量控制规范食品分子生物学检验SN/T 1022出口食品中霍乱弧菌检验方法 NMKL. No.156食品中致病性弧菌的检测和计数 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 3.1 PCRpolymerase chain reaction聚合酶链式反应。 3.2 MPCRmultiplex PCR多重PCR。 3.3 DHPLCdenaturing high performance liqid chromatography变性高效液相色谱。 3.4 TEAA E乙基饺乙酸盐。 5废弃物处理和防止污染的措施 5.1检测过程中的废弃物需经121℃高压火菌处理至少30 min后再弃置。 5.2检测过程中防止交叉污染的措施按GB/T?7103规定执行。 6原理 多重PCR,又称多重引物PCR或复合PCR.它是在同一PCR反应体系里加上两对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,其反应原现,反应试剂和操作过程与一般PCR相同。DHPLC分析技术是应用离子对反相液相色谱原理对DNA片段进行分离。离子对采用三乙基胺乙酸盐缓冲溶液(TEAA),核苷酸片段分子中带负电荷的磷酸根基团与TEAA分子中带正电荷的氨基发生静电作用相互吸引,同时TEAA分子中的三个乙基与固定相C,表面的烷基发生疏水作用力而相互吸引,通过流动相中的乙腈的梯度洗脱达到将不同大小的核苷酸片段分离。