SN/T 3961-2014 美人蕉黄斑驳病毒的检疫鉴定方法

SN/T 3961-2014.Detection and identification of Canna yellow mottle virus. 1范围 SN/T 3961规定了美人蕉黄斑驳病毒检测的程序和方法。 SN/T 3961适用于进出境植物及其产品中美人蕉黄斑驳病毒的检测。 2原理 美人蕉黄斑驳病毒的基因组特征是制定本检疫鉴定方法的主要依据。美人蕉黄斑驳病毒的分类地位、寄主范围、病害症状、分布地区、传播途径、粒体形态、基因组等参见附录A。 3仪器设备、用具及试剂 3.1仪器设备 高速冷冻离心机、电子天平(1/1000 g)、实时荧光PCR、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、-20 °C低温、冰箱和-80℃超低温冰箱凝胶成像分析系统、pH计、微波炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅、高压灭菌锅、超净工作台等。 3.2 用具 各种量程的可调移液器(1000uL、200μI、100μL、20μL、10μL、2μL)、PCR反应管、离心管(1.5 mL)、研钵等。 3..3试剂 巢式PCR试剂见附录B,实时荧光PCR试剂见附录C。 4检测与鉴定 4.1巢式PCR . 具体方法见附录B。 4.2实时荧光 PCR 具体方法见附录C。 5结果判定与记录 5.1 结果判定 ——当巢式PCR、实时荧光PCR两种检测方法的检测结果均呈阳性时,则判定为检出CaYMV。 ——当巢式PCR、实时荧光PCR两种检测方法的检测结果均呈阴性时,则判定为未检出CaYMV。