SN/T 3767.23—2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法第23部分:水稻KMD品系

SN/T 3767.23—2014. 1范围 SN/T 3767的本部分规定了水稻及其加工产品中转基因水稻KMD品系特异性的环介导等温扩增( LAMP)初筛检测方法。 SN/T 3767.23适用于水稻及其加工产品中转基因水稻KMD品系特异性的定性检测。本方法的定性检测低限为0.5%(质量分数)。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T 19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法 SN/T 3767.2--—2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法﹑第⒉部分:筛选方法 3防污染措施 环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T19495.2的规定。 4抽样与制样 按照GB/T 19495.7的规定执行。 5核酸提取纯化 6.1.1 一般原理 根据转基因水稻KMD品系外源基因和水稻边界序列(参见附录A)设计特异性内引物和外引物各一对,特异性识别目标序列上的六个独立区域,在反应缓冲液中脱氧核糖核酸三磷酸、寡核苷酸引物在Bst 聚合酶的作用下启动循环链置换反应,在特异目标序列启动互补链合成,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物;从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg'结合,产生副产物(焦磷酸镁)形成乳白色沉淀,加入显色液,即可通过颜色变化观察判定结果。在反应混合体系中不应存在 DNA聚合酶的抑制剂。在设置合适对照和在检测下限的情况下,定性检测结果可清楚判断样品是否为转基因产品。 6.1.2显色液显色原理 SYBR Green I是一种高灵敏的DNA荧光染料,可以嵌入方式结合到双链DNA的小沟内。当它与双链DNA结合时,荧光信号是游离状态的800~1000倍。在不发生扩增反应时,SYBR染料分子的荧光信号不发生改变,颜色显现为橙色;当发生扩增反应时,随着双链DNA的增加,SYBR染料的荧光信号也随之大幅度增强,其信号强度可代表双链DNA分子的数量,同时颜色由橙色变为绿色。