SN/T 3767.24—2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法第24部分:水稻LLRICE62品系

SN/T 3767.24—2014. 1范围 SN/T 3767的本部分规定了稻谷和大米中转基因水稻LL.RICE 62品系特异性的环介导等温扩增(1.AMP)初筛检测方法。 SN/T 3767.24适用于进出口的稻谷和大米中转基因水稻LLRICE62品系特异性的定性检测。本方法的定性检测低限为0.5%(质量分数)。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T 19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T 19495.7转基因产品检测抽样和制样方法 SN/T 2584水稻及其产品中转基因成分检测实时荧光PCR法 SN/T 3767.2—2014出口食品中转基因成分环介导等温扩增(LAMP)检测方法︰第⒉部分:筛选方法 3防污染措施 环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T 19495.2的规定。 4抽样与制样 按照GB/T19495.7的规定执行。 5核酸提取纯化 6.1.1一般原理 根据转基因水稻LLRICE 62品系外源基因和水稻边界序列设计特异性内引物、外引物和成环引物各一对,特异性目标序列和引物碱基序列参见附录A。引物特异性识别目标序列上的六个独立区域,利用Bst酶启动循环链置换反应,在水稻品系LLRICE62特异目标序列启动互补链合成,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物;从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg'结合.产生副产物(焦磷酸镁)形成乳白色沉淀,加人显色液,即可通过颜色变化观察判定结果。 6.1.2显色液显色原理 在LAMP反应体系中加入预先混合的钙黄绿素和锰离子,未发生反应时锰离子与钙黄绿素结合﹐钙黄绿素的荧光被淬灭,呈现橙色。当扩增反应发生时,扩增过程中产生的焦磷酸根离子可与锰离子结合,形成不可逆的沉淀物,将锰离子从钙黄绿素上释放下来,从而使钙黄绿素恢复荧光,同时体系中的镁离子与钙黄绿素结合,进一步加强钙黄绿素的荧光,可在365 nu紫外光激发下散发出约510 nm 的荧光,颜色也由橙色转为绿色。