SN/T 1574—2005 猪旋毛虫病酶联免疫吸附试验操作规程

SN/T 1574—2005. 1范围 SN/T 1574规定了猪血清中抗旋毛虫抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)检测的方法。本标准适用于猪血清中抗旋毛虫抗体的检测。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(epv 1SO 3696;1987) 材料与试剂 3.1猪旋毛虫病ELISA诊断试剂盒 2℃～8℃保存。试剂盒内应包括的物品如下:——--包被好的96孔酶标板; —-抗旋毛虫阳性对照血清﹔—抗旋毛虫阴性对照血清﹔——100倍浓度的酶标结合物﹔·——底物溶液﹔ ——显色剂(ABTS);——-终止剂; ——-血清和酶标结合物稀释液﹔—-10倍浓度的洗涤液。 3.2待检血清 按常规方法采血并分离血清﹐置4℃冰箱中备用,如需长期保存应置一20℃。 6.3 加样 在其余各孔中加入稀释的待检血清,每份待检血清加一孔,每孔100 pL。 6.4孵育 将酶标板置37℃恒温震荡器中孵育1 h,孵育后将各孔中的液体甩掉。 6.5洗涤 每孔加人250 pL~300 uL洗涤液,轻轻震动后甩掉,连续洗涤三次,最后一次洗涤后,将酶标板在吸水纸上轻拍,以去除孔内液体。 6.6加酶标结合物 在每孔中加入100 pL已稀释好的酶标结合物。 6.7孵育和洗涤 重复6.4、6.5的操作。 6.8加底物 在每孔中加人底物100 uL,然后将酶标板在室温下暗处放置30 min,轻轻摇晃酶标板,用405 nm的波长测OD值。 6.9反应终止 如果阳性对照血清孔的平均OD值≥1.000,阴性对照血清孔的平均OD值介于0.100～0.300之间(OD值计算见7.1),则向每孔加入50 pL终止液。