SN/T 1569—2005 进出口河豚中河豚毒素检验方法ELISA法

SN/T 1569—2005. 1范围 SN/T 1569规定了进出口河豚中河豚毒素检验的抽样﹑制样和酶联免疫吸附检测方法。本标准适用于进出口河豚鱼肉.皮、肝.生殖器中河豚毒素的检测。 2缩略语 TTXTetrodotoxin河豚毒素 ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay酶联免疫吸附法A值Absorption value吸光度值 BAS-HCHO-TTX Bovine Serum Albumin-HCHO - Tetrodotoxin conjugate牛白蛋白-甲醛-河豚毒素连接物 PBST Phosphate Buffered Saline-Tween磷酸盐吐温-20洗液 McAb-HRP Monoclonal Antibody-Horseradish Peroxidase单克隆抗体辣根过氧化物酶标记物 3抽样 3.1检验批 以同一海区、同一产地、同一养殖场的河豚为一检验批,同一检验批的商品应具有相同特征，如品种、包装、标记、产地、规格等。 3.2抽样数量 根据各检验批的质量及件数,按表1确定抽样件数。如为散装的应均匀抽样。 4.5.2试样保存 处理后的样品如不能及时检测,可取10g已均质待测样品加入10 mL的0.1%乙酸溶液﹐置于4℃保存。 4.5.3 包被 将BSA-HCHO-TTX用0.05 mol/1. PBS稀释至20 ug/mL,包被酶标板v每孔加100 uL,4℃过夜,倒净孔内溶液,加 3 mg/100 mL的牛白蛋白于20℃士1℃封闭30 min,用 PBS-T洗板3次,每次3 min,待用。 4.5.4酶标抗体浓度的选择 将购置的酶标抗体用0.05 mol/L PES稀释至100倍、500 倍、1 000倍和2 000倍,与40 ug/mL.TTX标准溶液等量混合,按4.5.6检测A值。A值为0.3左右的酶标抗体浓度为酶标抗体的工作浓度。 4.5.5 校正曲线的制备 4.5.5.1用0.05 mol/L PBS稀释TTX标准储备液至5 ug/mL、0、5 ug/mL、0.05 ug/mL、0.025 ug/mL,0.01 ug/ mL,制成5个浓度的TTX标准溶液。 4.5.5.2取各浓度的TTX标准溶液100 uL,分别与100 pL已选定工作浓度的McAb-HRP充分混合,置4℃过夜或37℃士1℃ 2 h备用。 4.5.5.3 取上述不同浓度的混合液100 uL,分别加入已包被的酶标板,置37℃±1℃ 1 h。 4.5.5.4洗板:用PBS-T洗板5次,每次3 min。 4.5.5.5显色:每孔加OPD底物液100 pL.,37℃置暗处30 min. 4.5.5.6终止显色:每孔加50 pL终止液。 4.5.5.7测定:于490 nm处测定每孔的A值。 4.5.6样品测定