SN/T 1396—2004 弓形虫病间接血凝试验

SN/T 1396—2004. 1范围 SN/T 1396规定了弓形虫病的间接血凝(IHA)试验操作方法。本标准适用于动物弓形虫病的检疫、诊断及抗体水平的检测。 2材料和试剂 2.196(12x8)孔110°V型血凝板及玻璃盖板。 2.2可调式微量移液器及吸头。 2.3平板振荡器。 2.4︰弓形虫IHA诊断液(抗原效价≥1∶ 1 024),标准阴性对照血清(效价≤1∶4),标准阳性对照血清(效价≥1∶1 024)。 2.5 稀释液按附录A所示要求配制,所用试剂均为分析纯。 3采样 无菌采动物静脉血液约1 mL~2 mL,静置自然析出血清或待血液凝固后以600 g离心分离血清，56℃水浴灭活30 min,预冷,用健康公绵羊红细胞(按血清/红细胞体积比约1∶1混匀)室温吸附2 h(或4℃冰箱过夜),600 g离心10 min,取上清(要求无血球.无溶血、无杂菌污染),置4℃冰箱备检。 4操作步骤 4.1取洁净的血凝板﹐于各孔中加入75 pL稀释液。 4.2取受检血清25 qL加人第一列孔中,用移液器反复吹吸混勾,取25puL加人第二列孔,混匀后取25 pL加入第三列孔中,如此4倍稀释至第6孔,混匀即1∶4 096弃去 25 pL(对于大量样品可只稀释至1∶64见表1)。 5结果判定5.1判定方法 a)100%的红细胞在孔底四周呈均匀,致密的膜样凝集,孔底中央无红细胞沉积,记“+十十+”。 b)75%的红细胞在孔底四周呈膜样凝集,有少量未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈很小的圆 点,记“＋＋＋”。 c)50%的红细胞松散的凝集在孔底四周,其余50%未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈较大的圆 点,记“＋”。 d)25%的红细胞凝集在孔底四周,其余大部分未凝集的红细胞沉积在孔底中央呈很大的圆点， 记“十”。 e)所有红细胞均不凝集,全部沉积在孔底中央呈规则的最大的圆点,记“一”.