SN/T 3580-2013 四种大豆危险性真菌多重实时荧光PCR检测方法

SN/T 3580-2013.Detection and identification of four kinds of soybean fungal diseases with multiplex real-time PCR. 1范围 SN/T 3580规定了大豆上的危险性真菌一大豆疫霉病菌(Phytophthorasojae)、大豆北方茎溃疡病菌(Dia porthe phaseolorum var. caulivora)、 大豆南方茎溃疡病菌( Dia porthe phaseolorum var.meridionalis)和大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis longicolla )的多重实时荧光PCR检测鉴定方法。 SN/T 3580适用于大豆上的大豆北方茎溃疡病菌、大豆南方茎溃疡病菌和大豆拟茎点种腐病菌以及大豆夹杂的土壤等传带大豆疫霉病菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法 SN/T 1131大 豆疫霉病菌检疫鉴定方法 SN/T 1193基因检验实验室技 术要求 SN/T 1899大豆 茎溃疡病菌检疫鉴定方法 3原理 根据大豆疫霉病菌、大豆北方茎溃疡病菌.大豆南方茎溃疡病菌和大豆拟茎点种腐病菌的分子生物学特性,设计其各自的特异性引物和探针。探针的5’标记为不同的荧光报告基团,3'端标记为荧光淬灭基团,通过寡核酸连接进行荧光谐振能量传递。在扩增反应中,由于扩增酶的5'端外切酶作用将与模板匹配的探针切割，使两个基团分开,在一定激发光条件下,荧光基团发出自身波长的光,不同的荧光信号标记类型其需要的激发光条件不同,能够被收集到的荧光信号也有所不同,从而实现多重检测。