SN/T 3964-2014 番茄严重曲叶病毒检疫鉴定方法

SN/T 3964-2014.Detection and identification of Tomato severe leaf curl virus. 1范围 SN/T 3964规定了番茄严重曲叶病毒的免疫学及分子生物学等检疫鉴定方法。 SN/T 3964适用于可能携带番茄严重曲叶病毒的寄主植物及其产品的检疫鉴定。 2番茄严重曲叶病毒基本信息 学名: Tomato severe leaf curl virus 缩写:ToSLCV 分类地位:双生病毒科(Geminiviridae),菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)。 传播途径:主要通过烟粉虱(Bemisiatabaci)传播,也可通过嫁接传播。 番茄严重曲叶病毒的其他信息参见附录A。 3原理 根据番茄严重曲叶病毒与抗体之间的特异性反应，对样品进行双抗体夹心酶联免疫吸附(DAS-ELISA)检测;根据该病毒DNA保守区的特异性进行常规PCR或实时荧光PCR检测,通过电泳条带大小或扩增曲线的变化进行结果判定。 4仪器设备、用具及试剂 4.1仪器设 备 酶标仪、普通PCR仪、实时荧光PCR仪、多功能电泳仪、高速冷冻离心机、凝胶成像系统、4℃冰箱、电子分析天平(0.001g)、恒温水浴锅、-80℃超低温冰箱、高压灭菌锅及制冰机等。 4.2 主要用具 可调移液器(2.5μL、10μL、20μL、100μL、1000μL)、离心管、PCR管、酶标板及研钵等。 4.3主要 试剂 除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂。 双抗体夹心酶联免疫吸附测定(DASELISA)试剂见附录B,常规PCR检测试剂见附录C。