SN/T 4275-2015 国境口岸类鼻疽伯克霍尔德菌的实时荧光PCR检测方法

SN/T 4275-2015.Detection of Burkholderia pseudomallei by real-time PCR at frontier ports. 1范围 SN/T 4275规定了国境口岸类鼻疽伯克霍尔德菌荧光PCR检测的对象,标本的采集、运输和保存,检测程序及结果报告。 SN/T 4275适用于国境口岸类鼻疽伯克霍尔德菌的筛选检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室 生物安全通用要 求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1类鼻疽伯克霍尔德菌Burkholderia pseudomallei 属革兰氏阴性菌,是引起人及动物严重感染性疾病类鼻疽的病原体。该菌广泛分布于东南亚和澳大利亚北部的水及土壤中。我国疫源地主要分布于海南、广东、广西、湖南、贵州、福建、香港、台湾等省区。人群对该菌普遍易感，临床症状表现复杂多样,分为急性败血症型、亚急性型、慢性型和亚临床型,最严重的症状是合并肺炎和急性败血症。该病病死率高。 3.2荧光PCRfluorescence polymerase chain reaction 又名实时荧光PCR(real-timePCR),实时荧光PCR方法有多种,本标准采用的是TaqMan水解探针法,其原理是在常规PCR的基础上，加入一条特异性的荧光探针,该探针为- .条寡核苷酸,两边分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR扩增时,利用Taq酶的5'-3’外切酶活性将探针酶切水解,使荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，从而荧光监测系统可以接收到荧光信号。每经过一个PCR循环,荧光信号也和目的片段一样,有一个同步指数增长的过程,信号的强度与检测对象的核酸含量成正比，可根据数学模型计算出检测对象的含量。