SN/T 4881-2017 鸡球虫病检疫技术规范

SN/T 4881-2017.Quarantine protocol for chicken coccidiosis. 1范围 SN/T 4881规定了鸡球虫病的粪便检查、组织检查、聚合酶链式反应(PCR)的操作规程。 SN/T 4881适用于鸡球虫病的检疫。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3病原 鸡球虫病是由艾美耳属(Eimeria)球虫寄生于鸡的肠上皮细胞内所引起的一-种寄生性原虫病。简介参见附录A. 4设备、材料和试剂 4.1设备 电炉、显微镜、天平、离心机、移液器、冰箱(4℃、- 20 ℃)、水浴锅(或金属浴)、PCR仪、凝胶成像 系统。 4.2材料 铜丝筛(60目)、尼龙筛(60目)、量筒、烧杯、接种环、研钵、平皿、吸管、载玻片、盖玻片、麦氏虫卵计数板。 4.3试剂 4.3.1实验室用水 应符合GB/T 6682的规定。 4.3.2饱和盐水 称取400gNaCl,放人烧杯中,加人1 000 mL水,加热搅拌至全部溶解后,静置冷却,有少量盐析出，即为饱和盐水。 4.3.3磷酸盐缓冲液 将下列试剂依次加入到1 000 mL烧杯中: 氯化钠         8.00 g 氯化钾         0.20 g 磷酸氢二钠  1.44 g 磷酸二氢钾  0.24 g 蒸馏水        至1000mL 充分搅匀,调pH值至7.4,并定容至1 000 mL。103.41 kPa压力下蒸气灭菌20 min,室温保存待用。 4.3.4   2.5%重铬酸钾溶液 称取5g重铬酸钾固体,溶于200 mL水中,搅拌至重铬酸钾完全溶解。 4.3.5   DNA 提取试剂或成品试剂盒 裂解缓冲液、0.5 mol/L EDTA、蛋白酶K溶液、核糖核酸酶溶液。