SN/T 2614—2010 葡萄苦腐病菌检疫鉴定方法

SN/T 2614—2010. 1范围 SN/T 2614规定了进出境植物检疫中葡萄苦腐病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于进出境葡萄果实和插条中葡萄苦腐病菌的检疫和鉴定。 原理 葡萄苦腐病菌在寄主上的症状,形态学特征及分子生物学特性是制定本标准的主要依据。 3仪器和用具 3.1仪器 生物显微镜(具测量功能),体视显微镜,超净工作台,光照生物培养箱,天平,高压灭菌器,台式高速离心机,pH计,水浴箱,PCR扩增仪,电泳仪,凝胶成像仪。 3.2用具 烧杯,三角瓶,量筒,试管,培养皿k直径9cm),载玻片,盖玻片,酒精灯,塑料研杵,移液器,移液器吸头,离心管,液氮罐。 4试剂和培养基 4.1试剂 琼脂粉,马铃薯,葡萄糖﹐琼脂糖,无菌双蒸水,液氮，Tr1s-HCI,氯化镁,盐酸，EDTA,氢氧化钠,乙酸钠,氯化钾，Tris，CTAB,TAE,无水乙醇,苯酚,溴化乙锭(EB),三氯甲烷,异丙醇,异戊醇,蛋白酶K,TaqDNA聚合酶,dNTP，DNA分子量Marker,PCR特异性引物PMA-1和 PMA-2,实时荧光PCR特异性引物PMA-P1,PMA-P2及探针PMA-Probe-457。 4.2培养基 马铃薯葡萄糖培养基(PDA);马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂20 g,1000 mL蒸馏水,灭菌。 5鉴定方法 5.1症状检查 病害症状参见附录A。 5.2分离培养