SN/T 2754.10—2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法第10部分:产气荚膜梭菌

SN/T 2754.10—2011. 1范围 SN/T 2754的本部分规定了检测出口食品中产气荚膜梭菌的环介导恒温核酸扩增(LAMP)法。本部分适用于出口食品中产气荚膜梭菌的筛选检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版禾(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 4789.13食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方祛一 GB 19489实验室生物安全通用要求 GB/T 27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测 3生物安全措施 为了保护实验室人员的安全,应由具备资格的工作人员检测产气荚膜梭菌,所有培养物和废弃物应按照GB 19489中的有关规定执行。 4防污染措施 防止污染措施应符合GBT 27403的规定。 5缩略语 下列缩略语适用于本文件。Betaine:甜菜碱 Bst酶[Bst DNA polymerase (large fragment)]:Bst DNA聚合酶(大片段)DNA (deoxyribonucleic acid):脱氧核糖核酸 6技术概要 根据产气荚膜梭菌特有的靶序列16SrRNA基因(参见附录A)设计的两对特殊的内、外引物,特异性识别靶序列上的六个独立区域,利用Bst酶启动循环链置换反应,在16SrRNA基因序列启动互补链合成,在同--链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物﹔从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg结合,产生副产物(焦磷酸镁)形成乳白色沉淀,加入显色液,即可通过颜色变化观察判定结果。 7试剂和材料