SN/T 2754.12—2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法第12部分:溶藻弧菌

SN/T 2754.12—2011. 1范围 SN/T 2754的本部分规定了检测茁食品中溶黏弧菌的环芥导恒温核酸扩增(LAMP)法。本部分适用于出口食品中溶藻弧菌的筛选检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室生物安全通用要求 GB/T 27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测NMKLNo.156食品中致病性弧菌的检测和计数 3生物安全措施 为了保护实验室人员的安全,应由具备资格的工作人员检测溶藻弧茵,所有培养物和废弃物应按照GB 19489中的有关规定执行。 4防污染措施 防止污染措施应符合GB/T27403的规定。, 5缩略语 6技术概要 根据溶藻弧菌胶原酶基因序列(参见附录A)设计特异性内引物、外引物各一对和一条环状引物,特异性识别靶序列上的7个独立区域。利用Bst酶启动循环链置换反应,在胶原酶基因序列启动瓦补链合成,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物﹔从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg*结合,产生副产物(焦磷酸镁)形成乳白色沉淀,加人显色液,即可通过颜色变化观察判定结果。 7试剂和材料 除有特殊说明外,所有实验用试剂均为分析纯;实验用水符合GB/T 6682中--级水的要求。 7.1引物:根据溶藻弧菌属特有的靶序列设计一-套特异性引物,包括外引物1,外引物⒉,内引物1,内引物⒉和环状引物。