SN/T 1460—2004 输入性蚊类携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒的检测方法

SN/T 1460—2004. 1范围 SN/T 1460规定了国境口岸输人性蚊类携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒检测的生物安全要求,检测对象﹑检测方法、结果的报告、阳性结果处置。 SN/T 1460适用于检验检疫机构对输入性蚊类体内携带西尼罗病毒与圣路易脑炎病毒的检测和报告，.对口岸发现的蚊类检测西尼罗病毒或圣路易脑炎病毒也可参照执行。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勒误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是未注明日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T6682︰分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 输入性蚊类imported mosquitoes 通过入境交通工具、集装箱﹑货物及行李带入境内的库蚊,伊蚊属。 3.2 西尼罗病毒west nile virus,wNv 为西尼罗热的病原体﹐属黄病毒科,黄病毒属。电镜下呈球形,有囊膜,40 nm~60 nm的20面体对 6病毒核酸分子检测━逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)6.1器材与试剂 6.1.1器材 PCR扩增仪、电泳仪,微量移液器及吸头、紫外观察灯,恒温培养箱、普通冰箱、低温冰箱(一80℃)、组织研磨器、电动匀浆器、离心机和离心管、倒置显微镜、PCR管,剪刀、镊子。 6.1.2试剂 6.1.2.1水 应符合GB/T 6682中一级水的规格。用于PCR(包括核酸抽提)时所用的水必须是无RNA酶的水。 6.1.2.2Taq DNA聚合酶 一20℃保存,不要反复冻融或温度剧烈变化。 6.1.2.3 逆转录酶 -20℃保存,不要反复冻融或温度剧烈变化。 6.1.2.4 RNA 抑制剂(RNasin) --20℃保存,不要反复冻融或温度剧烈变化。 6.1.2.5dNTP 含dCTP、dGTP,dATP,dTTP各10 mmol/L. 6.1.2.6引物 6.1.2.6.1西尼罗病毒引物