SN/T 5364.3—2021 出口食品中致病菌检测方法微滴式数字PCR法第3部分:溶藻弧菌

SN/T 5364.3—2021. 1范围 SN/T 5364.3规定了食品中溶藻弧菌的微滴式数字PCR检测方法。本文件适用于食品中溶藻弧菌的快速定性检测。 SN/T 5364.3的检出限为1CFU/25 g~5 CFU/25 g(或1CFU/25 mL~5 CFU/25 mL)。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测 NMKL No.156食品致病性弧菌的检测和计数(Pathogenic Vibrio species detection and enumer-ation in foods) 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 DNA( deoxyribonuleic acid):脱氧核糖核酸。 ddPCR(droplet digital polymerase chain reaction):微滴式数字PCR。PCR(poly merase chain reaction):聚合酶链式反应。 5方法原理 针对溶藻弧菌GroEL基因保守序列设计引物、探针,将一定浓度的引物、探针与模板DNA及数字PCR反应预混液混合﹐配成 PCR反应体系。将该数字PCR体系分布到10 000~20 000个微滴中﹐使大部分微滴中模板DNA分子的数量为1或o,然后进行PCR扩增。GroEL基因探针5’端标记FAM