SN/T 3578-2013 大豆猝死综合症北美种活性检测方法

SN/T 3578-2013.Viability detecion of Fusarium virguliforme O' Donnell et T. Aoki. 1范围 SN/T 3578规定了应用激光扫描共聚焦显微镜对大豆猝死综合症病菌北美种(Fusariumvirguliforme O'Donnell et T. Aoki)的活性进行检测的方法。 SN/T 3578适用于大豆猝死综合症病菌北美种相关寄主中機带的大豆猝死综合症病菌北美种的活性检测鉴定。 2原理 应用荧光染料对病原菌镰刀形分生孢子进行染色处理，根据大豆猝死综合症北美种病菌不具活性的孢子染上荧光、具有活性的孢子不染上荧光的染色效果差异的特点,运用激光扫描共聚焦显微镜对病菌孢子进行检测,分析其活性情况。 3仪器用具和试剂 3.1 仪器用具 激光扫描共聚焦显微镜、显微镜、高压灭南锅、生物安全柜、生化培养箱、冰箱。 3.2 试剂 碘化丙啶(PI)、二甲基亚枫(DMSO)、琼脂粉。 4活性检验方法 4.1 病原菌孢子获取 在显微镜下,将发现确定为大豆猝死综合症病菌北美种镰刀形分生孢子挑到灭菌水中，配制成浓度大于1个孢子/μL的孢子悬浮液,镜检,备用。 4.2 孢子染色 取1μL碘化丙啶染料(以DMSO为溶剂,浓度为0. 5 mmol/L)加人200 μL孢子悬浮液中,混匀，室温下避光染色15 min,16000g离心1 min去上清液终止染色,灭菌去离子水洗涤一次,重悬,孢子浓度大于1个孢子/pL。避光放置备用。