SN/T 4649-2016 瓜蔓枯病菌检疫鉴定方法

SN/T 4649-2016.Detection and identification of Did ymella bryoniae (Auersw.) Rehm. 1范围 SN/T 4649规定了瓜类蔓枯病菌Didymella bryoniae (Auersw.) Rehm的检疫鉴定方法。 SN/T 4649适用于进出口瓜类植物种子、植株、果实中瓜类蔓枯病菌的检疫鉴定。 4方法原理 瓜蔓枯病菌的症状表现、培养性状，形态学特征致病性及PCR特异性扩增检测结果作为瓜蔓枯病菌的检疫鉴定依据。 5仪器设备和主要试剂 5.1 仪器设备 生物显微镜、体视显蔽镜、高速冷冻离心机、纯水仪、超净工作台、高压灭菌锅、制冰机、PCR仪、凝胶成像系统、电泳仪、培养箱、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡振荡器。 5.2主要 试剂 除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。 1%次氯酸钠.DNA提取相关试剂(盒),PCR相关试剂，电泳试剂。 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)(配制方法见附录A)。 6检验方法 6.1 取样和制样 按照SN/T1809的方法抽取进出境瓜类种子样品。 挑选皱缩、干瘪、变色、残缺的种子或有霉变的籽粒。对送检的植株茎部、叶部和果实进行检查时，选取叶片上呈现近圆形或不规则形的黑褐色病斑;茎部选取呈椭圆形或短条状褐色凹陷斑;果实选取圆形、暗褐色的凹陷斑,病斑表面呈星状开裂，内部呈木栓状干腐，发黑、腐烂的果实(参见附录B和附录C)进行病原菌的分离。