SN/T 3586-2013 羊痒病抗性基因型检测方法

SN/T 3586-2013.Quarantine protocol for scrapie resistance gene genotyping. 1范围 SN/T 3586规定了羊痒病抗性基因型检测方法。 SN/T 3586适用于绵羊血液样本的羊痒病朊蛋白编码基因的分型。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分 析实验室用水规格和试验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PRNP:1朊 蛋白编码基因( prion protein) Real-Time PCR : Real-Time Polymerase Chain Reaction实时荧光定量 PCR DNA :deoxyribonucleic acid脱 氧核糖核酸 4试验原理 羊痒病概述参见附录A。 引起羊痒病的病原朊蛋白是一种正常的唾液酸糖蛋白(PrP*)在二级结构发生改变后形成的异常蛋白。该病的发生与绵羊朊蛋白编码基因PRNP遗传多样性密切相关,主要表现在PRNP第136、154和171位密码子组成的PRNP基因型与绵羊对痒病的抗病性的联系。根据GenBank报道的PRNP序列,设计合成了3套特异性的引物和Taqman探针，借助实时荧光定量PCR检测体系及其之后的终点读板模式,对PRNP的第136、154和171位密码子进行检测,用来判定被检测羊是否含有传染性羊痒病抗性基因。 5试验材料 5.1试剂 5.1.1 各型绵羊PRNP标准品:136纯合子、154纯合子、171-1纯合子、171-2纯合子。 5.1.2基因扩增预混液:TaqmanUniversalPCRMasterMix或其他基因扩增预混液。