SN/T 3438-2012 南方菜豆花叶病毒检疫鉴定方法

SN/T 3438-2012.Detection and identification of southern bean mosaic virus. 1范围 SN/T 3438规定了南方菜豆花叶病毒的血清学和分子生物学检测方法。 SN/T 3438适用于可能携带南方菜豆花叶病毒的豆科种子的检疫鉴定。 2原理 南方菜豆花叶病毒( southern bean mosaite Virus,SBMV)为南方菜西花叶病毒属(sobemovirus)的 典型成员。抗原特性和基因组特征(参见附录A)是检疫鉴定的主要依据。 3仪器、设施及试剂 3.1 仪器与设施 酶联检测仪、电子天平(感量0.0001 g)、定性PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、恒温水浴、低温冰箱、普通冰箱、离心机等;微量移液器(2.5μL,10μL,20μLL,100μL,200μL,1 000μL) ;酶联板、研钵等;防虫温室。 3.2 试剂 酶联检测试剂(见附录B),RT-PCR检测试剂(见附录C) 4检疫与鉴定 4.1 制样 挑取畸形、不成熟的种子播于灭菌土中,待长出3~4片真叶后将装现症状的植株编号,未表现症状的植株分组(10株为1组)并编号。采集的叶片分成两份,分别用于酶联检测和分子生物学检测。 4.2检测 4.2.1双抗体夹心酶联免疫吸附检测 把制备的样品上清液加人已包被SBMV抗体的96孔酶联板中,进行DAS-ELISA检测。每个样品平行加到两个孔中。健康的植物组织作阴性对照，感染SBMV的植物组织作阳性对照，样品提取缓冲液作空白对照,其中阴性对照种类和材料(如:种子或叶片)应尽量与检测样品一致。不同的检测试剂或试剂盒根据试剂或试剂盒的说明操作。 具体操作见附录B。