SN/T 3287-2012 棉花皱叶病毒分子检疫鉴定方法

SN/T 3287-2012.Molecular detection and identification of cotton leaf crumple virus. 1范围 SN/T 3287规定了棉花皱叶病毒(参见附录A)核酸的提取、PCR及实时荧光PCR检测的方法。 SN/T 3287适用于进出境植物检疫中棉花皱叶病毒的检疫鉴定。 2方法原理 棉花皱叶病毒学名:Cotton leal crumple virus, 缩写:CLCrV。该病毒的分子生物学特征是本标准制定的主要依据。 3仪器设备、用具及试剂 3.1仪器设备 PCR仪、电泳系统、高速冷冻离心机、凝胶成像系统振荡器、4℃冰箱、电子分析天平(0.001g)、超净工作台、水浴锅、-80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机微波炉。 3.2用具 可调移液器(2.5μL,10μL,20μL,100μL,1000μL)及灭菌的吸头、离心管、PCR管和研钵等。 3.3试剂 除有特殊说明外,所有实验用试剂均为分析纯或生化试剂。 实时荧光PCR试剂、三氯甲烷、异戊醇、乙醇、Taq DNA聚合酶、DNA分子标记、溴化乙锭、琼脂糖等。 4检疫鉴定方法 4.1常规PCR检测 提取样品DNA,设置阳性对照、阴性对照和空白对照,进行常规PCR扩增。具体操作步骤见附录C。 4.2实时 荧光PCR检测 提取样品DNA,设置阳性对照、阴性对照和空白对照，进行实时荧光PCR扩增。具体操作步骤见附录D。