SN/T 3439-2012 小西葫芦绿斑驳花叶病毒检疫鉴定方法

SN/T 3439-2012.Detection and identification of zucchini green mottle mosaic virus. 1范围 SN/T 3439规定了小西葫芦绿斑驳花叶病毒检疫鉴定的血清学和分子生物学检测方法。 SN/T 3439适用于可能携带小西葫芦绿斑驳花叶病毒的葫芦科作物种子和种苗的检疫。 2原理 2.1分类地位 学名:zucchini green mottle mosaic virus 缩写:ZGMMV 分类:烟草花叶病毒属(Tobamovirus) 2.2检疫鉴定依 据 抗原特性和基因组特征是检疫鉴定的依据。生物学特性和基因组特征参见附录A。 3仪器、设施及试剂 3.1仪器与设施 酶联检测仪、电子天平(感量0.0001g)、定性PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、恒温水浴、低温冰箱、普通冰箱、离心机等;微量移液器(2,5uL、10 μL、20μL、100μL、200μL、1000μL) ;酶联板、研钵等;防虫温室。 3.2试剂 酶联免疫吸附测定试剂(见附录B)、RT-PCR检测试剂C现附录C)。 4检测样品的制备 4.1 种子样品制备 挑取畸形不成熟的种子播于灭菌土中,置于防虫温室,待长出3~4片真叶后将表现症状的植株编号单独检测,未表现症状的植株分组(10株为1组)并编号,采集的叶片分成2份,根据需要分别用于酶联免疫测定和分子检测。