SN/T 4875-2017 来檬丛枝植原体检疫鉴定方法

SN/T 4875-2017.Detection and identification of Lime witches’broom phytoplasma. 1范围 SN/T 4875规定了来檬丛枝植原体的检疫和鉴定方法。 SN/T 4875适用于进境来檬苗木中来檬丛枝植原体的检疫和鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T 1157进出境植物苗木检疫规程 3来檬丛枝植原体基本信息 英文名:Lime witches’broom pbytoplasma 分类地位:软壁菌门(Tenericutes)，柔膜菌纲( Mollicutes)，非固醇菌原体目(Acholeplasmatales),非固醇菌原体科(Acholeplasmataceae),植原体属(Phytoplasma),16S+II植原体组。 来檬丛枝植原体的其他信息参见附录A. 4方法原理 来檬丛枝植原体生物学特性和基因特性作为本标准鉴定方法的主要依据。 以组织材料症状观察、DAPI染色的形态学为初步筛查方法;以植原本核糖体16SrDNA序列特征为主要的判定依据。 5仪器设备和主要试剂 5.1仪器设备 定性PCR仪、超净工作台.高压灭菌锅、台式冷冻离心机、纯水仪、台式小型离心机、冰箱、旋涡震荡 器、微量进样器、电泳仪、水浴锅.凝胶成像系统等。 5.2 用具 移液器、研钵、离心管、PCR管、量简、烧杯、酒精灯、镊子等。 5.3主要试剂 除非另有说明,在分析中仅使用分析纯试剂和去离子水。PCR反应体系用双蒸水。其他试剂比如各种溶液、缓冲液和培养基都是检测方法特有的，都应按附录B要求准备。商品化试剂参见其使用说明。 植物DNA提取试剂盒、PCR Premix、超纯水、DNA marker及DNA提取试剂等。