SN/T 4824-2017 牛羊赤羽病病毒环介导等温扩增检测方法

SN/T 4824-2017.Detection method for Akabane virus of bovine and ovine by LAMP. 1范围 SN/T 4824规定了牛羊赤羽病病毒环介导等温扩增检测方法。 SN/T 4824适用于牛羊赤羽病病毒核酸现场快速初筛检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AKAV赤羽病病毒( Akabane virus) LAMP环介导等温扩增(Loop- mediated isothermal amplification) 4赤羽病概况 赤羽病病毒为单股RNA病毒,属布尼病毒科布尼病毒属,由其引发的赤羽病概况参见附录A. 5试剂 5.1 RNA抽提试剂盒。 5.2 Bst DNA聚合酶。 5.3 Betaine 甜菜碱。 5.4 0.01 mol/L PBS缓冲液(见附录B)。 5.510X Thermopol缓冲液。 6设备与材料 6.1冷冻离心机。 6.2 恒温水浴箱。 6.3 生物安全柜。 6.4 移液器 7原理 根据AKAV特异性S基因6个特异区域设计两对引物,在具有连置换活性的Bst DNA聚合酶的作用下，由4条引物识别靶序列上的6个特定区域(参见C.1).在63℃左右对核酸进行等温扩增。扩增产物加入染料后阳性孔会出现肉眼可见的绿色。