SN/T 3306.11-2017 国境口岸环介导恒温扩增(LAMP)检测方法第11部分:副溶血性弧菌

SN/T 3306.11-2017.Loop-mediated isothermal amplification detection method at frontier port- Part 1 1:Vibrio parahaemolyticus. 1范围 SN/T 3306.11规定了在国境口岸利用环介导恒温核酸扩增(LAMP)法检测副溶血性弧菌的检测对象、检测程序及检测结果的报告。 SN/T 3306.11适用于国境口岸副溶血性弧菌菌株的筛选检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB4789.7食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室生物安 全通用要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 WS271感染性腹泻诊断标准 人间传染的病原微生物名录(卫科教发[2006]15号) 4生物安全及 防污染措施 实验生物安全要求、操作及处理按照GB19489和《人间传染的病原微生物名录》的规定执行，由通过生物安全培训并具备资质的工作人员进行。防止污染措施应符合WS/T 230的规定。 5技术概要 根据副溶血性弧菌的特异性毒力基因序列设计特异性内外引物及环状引物各一对,共三对引物,特异性识别靶序列上的M36437基因,利用Bst酶启动循环链置换反应,在特异性基因序列启动互补链合成,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环DNA混合物;从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合,产生副产物(焦磷酸镁)形成乳白色沉淀,即可通过反应液中的浑浊程度判定结果。亦可加人显色液，通过观察颜色变化判定结果。