SN/T 1207-2003 猪痢疾短螺旋体分离培养操作规程

SN/T 1207-2003. 范围 SN/T 1207规定了猪痢痰短螺旋体分离培养的方法。本标准适用于实验室对猪痢疾的诊断。 2缩略语 下列缩略语适用于本标准。 2.1SD:猪痢疾。 2.2B.h:猪痢疾短螺旋体。 2.3 B. i:非致病性短螺旋体。 2.4 B.p;结肠菌毛样短螺旋体。 3猪痢疾短螺旋体分离培养 3.1材料准备 厌氧罐,高纯度氢气,高纯度二氧化碳、真空泵,恒温箱,触媒、培养基、9 cm 的培养皿、抗生素、脱纤牛血等。 3.2病料的采取和保存 采取新鲜粪便,肠内容物或病变粘膜,不要冰冻,迅速镜检或分离培养。粪便等拭子可置于含有0.5 mL磷酸缓冲盐水(0.01 mol/1,pH7.2)(见第A.4章)的试管内,密封后O℃～4℃保存,3 d内必须分离培养。两头结扎的结肠段,o℃~～4℃可保存5 d~7 d。 3.3 分离用培养基 猪痢疾短螺旋体(B.h)选择分离培养基B,其成分和配制方法见附录A,培养基现用现配。 5致病性测定 致病性测定需用10代以内的菌种。将在血液琼脂平皿上的菌落用生理盐水冲洗,低速离心去琼脂,使每ml.含5.0×10’个菌体。 结肠接种:取两周龄健康(或SPF)仔猪两头,饥饿48 h。全身麻醉后剖腹暴露结肠,先注入200 mL~400 mL灭菌生理盐水,用手将肠内容物向后推移。结扎8 cm~10 cm肠段,每段间隔2 cm,不要损伤血管。一-头猪视需要能结扎6个~10个肠段,可同时测定5个~~9个菌株的致病性。每个肠段注人5 mL菌液(即5 mL×5.0×10’个菌体),另设--肠段注射5 mL 生理盐水作为对照。另一头接种相同的菌株和菌量,但肠段部位的前后顺序与第一头相反。接种后缝合腹腔,不给食,隔3 d剖检。如接种肠段比对照肠段明显肿胀,液体增多、充血显著且涂片镜检的病原菌形态特征与自然病例一致,则认为此菌株有致病性。