SN/T 2368-2009 番茄斑萎病毒检疫鉴定方法

SN/T 2368-2009. 1范围 SN/T 2368规定了进境植物检疫中对番茄斑萎病毒的检疫鉴定方法。 SN/T 2368适用于所有进境种子.苗木等植物性繁殖材料中番茄斑萎病毒的检疫鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于木标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 SN/T 2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3原理 3.1学名与分类地位 学名:Tomato spotted wilt virus缩写:TSwv 分类地位:布尼安病毒科(Bunyaviridae),番茄斑萎病毒属(Tospovirus). 3.2检疫鉴定依据 番茄斑萎病毒的血清学特性、分子生物学特性和生物学特性是检疫鉴定的主要依据。其他资料参见附录A。 4仪器设备、用具及试剂 4.1仪器设备 酶联检测仪,天平(感量,1/10 000 g)、pH计、微量榨汁机、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、隔离温室﹑恒温水浴.低温冰箱等。 微量移液器(2pL,10 pL,20 pL,100 pL,200 .L,1 000 pL),酶联板、研钵、eppendorf管、花盆,消毒土等。 4.2试剂 酶联免疫吸附测定试剂(见附录B)、RT-PCR检测试剂(见附录C)。 5抽样与样品制备 5.1抽样 抽样按照SN/T 2122的规定执行。 5.2种子样品制备 将种子(重点挑取畸形、不成熟的种子)播于灭菌土中，于25℃生长并进行症状观察。待长出3片~4片叶后将表现症状的植株编号,未表现症状的植株分组(10株为1组)并编号。采集叶片用于酶联免疫测定、RT-PCR检测及生物学测定。 5.3苗木样品制备