GB/T 33410-2016 生化试剂中蛋白酶K活性检测方法

GB/T 33410-2016. 1范围 GB/T 33410规定了生化试剂中蛋白酶K活性检测方法。 GB/T 33410适用于分子生物学实验中使用的蛋白酶K活性的测定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蛋白酶K活性单位protease K activity unit 在55℃,pH 8.0时,1 min内水解酪蛋白产生1 ug L-酪氨酸为一个酶活性单位。注:活性单位为U/mg.U/g或U/mL。 4原理 蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶,可催化含有较多的丝氨酸位点的α-酪蛋白水解。本方法中采用a酪蛋白为反应底物,经蛋白酶K催化水解为L-酪氨酸,在275 nm处测定吸光度值。再通过测量各个浓度的L-酪氨酸标准溶液在275 nm 处的吸光度值,并构建标准曲线得出线性回归方程，以外标法定量。计算蛋白酶K的酶活性。 5仪器设备及器具 5.1 恒温水浴锅:控温精度士0.2 ℃. 5.2 pH计:精确至0.01 pH. 5.3 紫外-可见分光光度计:吸光度值精确至0.001. 5.4 1 cm石英比色皿。 5.5电子天平:感量0.000 1 g.