QB/T 4363-2012 牙膏中蛋黄球蛋白(IgY)活性效价测定方法

QB/T 4363-2012.Determination of immunoglobulin egg yolk in toothpastes. QB/T 4363规定了牙膏中蛋黄球蛋白(IgY) 活性效价的检测方法。 QB/T 4363适用于牙膏中添加蛋黄球蛋白(IgY) 活性效价的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T601化学试剂 标准滴定 溶液的制备 GB/T603化学试剂试验方 法中所用制剂及制品的制备(NEQ ISO 6353-1:1982) GB/T 6682分析实验室用水规格 和试验方法(NEQ ISO 3696: 1987) 3试验方法 QB/T 4363所用试剂和水，除特殊规定外，均为分析纯试剂和符合GB/T 6682规定的水。 QB/T 4363中分析用标准滴定溶液、试验方法中所用制剂和制品，除特殊规定外,均按GB/T 601和GB/T6031的规定制备。 3.1 原理 利用抗原-抗体特异性免疫反应的原理，将抗原包被于酶标板上，加入特异性IgY抗体反应，再加标有辣根过氧化酶的抗IgY的第二抗体，最终加入酶的底物，使酶催化底物显色，结果为阳性且稀释比最大的为最终效价比。 3.2仪器和设备 a) 96 孔酶标板: b) 移液枪2把，量程分别为: 10 μL~ 100 p山L、 100 μ~1 000 puL; . c)微量进样 器:精确度0.50μL， 量程0 μuL~ ~25 L; d) 分析天平:精确至0.00 g: e) 电热恒温箱:精度士1 C; f) 冰箱:精度士1C; g) 酶标仪:型号Multiskan MK3或相当仪器。 3.3生化试剂 a) 抗原:将菌浓度为2X 10 cfu/mL的变形链球菌ATCC 25175和亲缘链球菌ATCC 0715灭活制得; b) 酶标第二抗体:兔抗鸡lgG辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗。 3.4试剂配制 3.4. 1包被缓冲液: 准确称取NaxCO, 1.59 g、NaHCO3 2.93 g,加双蒸馏水定容至1 000 mL,得0.05mol/L 的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，4 C保存，有效期14天. 3.4.2稀释抗原: 用包被缓冲液稀释抗原至合适浓度。变形链球菌ATCC 25175和亲缘链球菌ATCC 0715的抗原用包被缓冲液稀释(即1份抗原加4份包被缓冲液)● 3.4.3洗涤液(PBST) :准确称取NaCl 20.20 g. KH2PO4 0.20g、Na2HPO412H2O 2.83 g.加Tween-205.0mL，加双蒸馏水定容至1 000mL, 4 C保存，有效期3个月。 3.4.4稀释液(PBS):准确称取NaCl 8.0g、KHzPO, 0.20 g. NazHPOa 12H2O 2.90g、KCl 0.20g,加双蒸馏水定容至1 000mL, 4 C保存，有效期3个月。